Тонкослойная хроматография.
Тонкослойная хроматография (ТСХ) первоначально была разработана для разделения липидов. Хотя хроматография на бумаге быстрее, чем хроматография на колонке, к недостаткам ее следует отнести то, что бумага может быть изготовлена только из материалов на основе целлюлозы, что не позволяет применять ее для разделения неполярных веществ. Тонкослойная хроматография сохраняет все преимущества хроматографии на бумаге, но при этом позволяет использовать любой материал, который можно тонко измельчить и получить затем однородный слой. Это могут быть неорганические вещества, например силикагель, окись алюминия, диатомовая земля и силикат магния, а также органические вещества, в частности целлюлоза, полиамиды и порошок полиэтилена.
Пластинку с закрепленным сорбентом помещают в камеру, содержащую растворитель, и проявляют восходящей хроматографией. После того как фронт растворителя почти достигнет верхнего края, пластинку вынимают из камеры и сушат. Для получения двумерной хроматограммы высушенную пластинку
можно повторно хроматографировать под прямым углом в другом растворителе. Положение пятен, как и при хроматографии на бумаге, определяют по окраске, по флуоресценции или при опрыскивании различными реагентами, которые реагируют с веществами в пятне с образованием окрашенных продуктов. Обычно используют следующие реагенты: нингидрин для аминокислот, родамин В для липидов, хлорид сурьмы для стероидов и терпенов, серную кислоту с последующим нагреванием практически для
всех органических соединений (происходит обугливание), перманганат калия в серной кислоте для углеводородов, анисовый альдегид в серной кислоте для углеводов, пары брома для олефинов и т. д. Вещества можно элюировать путем соскребания.
Для ТСХ в нашей лаборатории используются как фирменные так и самодельные пластинки. ТСХ хроматограмму метиловых эфиров жирных кислот и продуктов метилирования можно посмотреть здесь.
См. также:
Разделение нейтральных липидов тонкослойной хроматографией в различных системах растворителей.
|
Источник.
Д. Фрайфелдер Физическая биохимия // М.: Мир., 1980, с. 187-188.
Типичная камера для проявления хроматографической пластинки с тонким слоем
- крышка
- стеклянная камера
- пластинка ТСХ
- сорбент
- место нанесения пробы
- растворитель
|
